通過改變外源cDNA在質(zhì)粒中的插入方向或選用不同的RNA聚合酶，可以控制RNA的轉(zhuǎn)錄方向(即以cDNA的哪條鏈為模板轉(zhuǎn)錄RNA)，從而可以得到與mRNA同序列的同義RNA探針(senseprobe)或與mRNA互補(bǔ)的反義RNA探針(antlsense probe)，后者即互補(bǔ)RNA(cRNA)探針。通常用同義RNA探針作cRNA探針的陰性對(duì)照。ELISA試劑盒
由于在體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)物中可提供有標(biāo)記物標(biāo)記的核苷酸為原料．因此經(jīng)過體外轉(zhuǎn)錄就能得到標(biāo)記的cRNA探針。ceRNA探針是單鏈探針，故以cRNA探針進(jìn)行雜交反應(yīng)可避免應(yīng)用雙鏈cDNA探針作雜交反應(yīng)時(shí)存在的兩條鏈之間的復(fù)性問題。cRNA和mRNA之間形成的雜交體要比cDNA-mRNA雜交體穩(wěn)定．因此雜交反應(yīng)后可經(jīng)受高嚴(yán)格度洗滌。cRNA -mRNA雜交體不受RNA酶的影響，故雜交后還可用RNA酶處理，以除去未結(jié)合的探針。此外，體外轉(zhuǎn)錄合成的cRNA探針的長(zhǎng)度比較一致。ELISA試劑盒
由于cRNA探針具有以上優(yōu)點(diǎn)，因此在分子雜交中，特別是在原位雜交中的應(yīng)用較廣泛。但cRNA探針的制備過程較復(fù)雜，需要較高的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)條件，cRNA對(duì)RNA酶敏感，易被RNA酶破壞，因而在操作過程中需嚴(yán)格防止RNA酶污染。ELISA試劑盒
在線客服
會(huì)員_a.png)